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1.
Electron. j. biotechnol ; 11(4): 15-16, Oct. 2008. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-531920

RESUMO

RNA extraction from recalcitrant plant tissues is frequently complicated by the presence of secondary metabolites, polysaccharides and polyphenols. These compounds may co precipitate with RNA, often rendering it unsuitable for either cDNA synthesis or hybridization in northern blot analyses and therefore, interfering with the gene analysis expression in such tissues. We have developed an efficient RNA extraction method from A. mexicana tissues. The procedure includes the use of polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), to remove secondary metabolites, proteins and polyphenols, and a two-step precipitation with LiCl, to eliminate polysaccharides, and thus increasing RNA yield. The quality of the resulting RNA was evaluated spectrophotometrically and by agarose gel electrophoresis. Moreover, the RNA obtained by this method, could be used directly for both RT-PCR and northern blot analysis, without any further purification.


Assuntos
Papaveraceae/anatomia & histologia , Papaveraceae/genética , RNA de Plantas , Northern Blotting/métodos , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
2.
São Paulo; s.n; 19 jun. 2007. 82 p. ilus, graf.
Tese em Português | LILACS | ID: lil-464455

RESUMO

A banana é um fruto climatérico que apresenta alta taxa respiratória e alta produção de etileno após a colheita, o que a torna altamente perecível. Acredita-se que o 1-MCP é capaz de ligar-se ao receptor do hormônio etileno, bloqueando sua ação e, conseqüentemente, retardando o amadurecimento do fruto. Bananas (Musa acuminata AAA cv. Nanicão) com aproximadamente 110 dias pós-antese foram armazenadas em condições controladas de umidade e temperatura. Parte da amostra foi tratada com 1-MCP (100 nl/L, outra parte foi tratada com etileno (100 ppm – 7L/min), e, uma terceira parte, foi mantida como controle. Os frutos foram caracterizados, durante o período de amadurecimento, em relação à produção de etileno e C`O IND. 2’ (por cromatografia à gás) , à concentração de amido (pelo método enzimático descrito por Cordenunsi e Lajolo 1995) e açúcares (glicose, frutose, sacarose e maltose – por HPLC-PAD). Também foram analisados os comportamentos das enzimas α e ß – amilases, fosforilase, DPE 1 e DPE 2 por atividade enzimática in vitro ou por P.A.G.E. nativo e, quando possível, foram avaliados os comportamentos destas enzimas frente a tradução (Western blotting) e transcrição protéica (Northern blotting). A degradação de amido, assim como a respiração, a produção de etileno e síntese de açúcares foram retardadas nos frutos tratados com o 1-MCP. Como conseqüência destas mudanças, também houve uma alteração nos perfis das atividades enzimáticas...


Assuntos
Amido/metabolismo , Metabolismo dos Carboidratos , Tecnologia de Alimentos , Musa , Fosforilases , Northern Blotting/métodos , Western Blotting/métodos
3.
The Korean Journal of Parasitology ; : 15-20, 2006.
Artigo em Inglês | WPRIM | ID: wpr-96038

RESUMO

Free-living amoebae of the genus Acanthamoeba are causative agents of granulomatous amebic encephalitis and amebic keratitis. Because the virulence of Acanthamoeba culbertsoni cultured in the laboratory is restored by consecutive brain passages, we examined the genes induced in mouse brain-passaged A. culbertsoni by differential display reverse transcriptase polymerase chain reaction (DDRT-PCR). Enhanced A. culbertsoni virulence was observed during the second mouse brain passage, i.e., infected mouse mortality increased from 5% to 70%. Ten cDNAs induced during mouse brain passage were identified by DDRT-PCR and this was confirmed by northern blot analysis. BlastX searches of these cDNAs indicated the upregulations of genes encoding predictive NADH-dehydrogenase, proteasomal ATPase, and GDP-mannose pyrophosphorylase B, which have previously been reported to be associated with A. culbertsoni virulence factors.


Assuntos
Camundongos , Animais , Virulência/genética , Regulação para Cima , Inoculações Seriadas , Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos , Dados de Sequência Molecular , Camundongos Endogâmicos ICR , Genes de Protozoários/genética , Regulação da Expressão Gênica , Perfilação da Expressão Gênica/métodos , DNA de Protozoário/biossíntese , DNA Complementar/biossíntese , Clonagem Molecular/métodos , Encéfalo/parasitologia , Northern Blotting/métodos , Amebíase/mortalidade , Acanthamoeba/genética
4.
J Biosci ; 2005 Dec; 30(5): 657-67
Artigo em Inglês | IMSEAR | ID: sea-110857

RESUMO

In an attempt to determine a cold defense mechanism in plants, we have attempted to characterize changes occurring in the expression of cold-regulated transcript levels in the hot pepper (Capsicum annum), using cDNA microarray analysis, combined with Northern blot analysis. After analysing a 3.1 K hot pepper cDNA microarray, we isolated a total of 317 cold inducible genes. We selected 42 genes which were up-regulated and three genes which were down-regulated due to cold treatment, for further analysis. Among the 45 genes which appeared to be up-regulated by cold, 19 genes appeared to be simultaneously regulated by salt stress. Among the up-regulated cold-stress genes, we identified a variety of transcription factors, including: a family of 4 ethylene-responsive element binding protein (EREBP, designated CaEREBP-C1 to C4) genes, a bZIP protein (CaBZ1), RVA1, Ring domain protein, HSF1, and the WRKY (CaWRKY1) protein. As mentioned earlier, several genes appeared to be induced not only by cold stress, but also simultaneously by salt stress. These genes included: CaEREBP-C3, CaBZ1, putative trans-activator factor, NtPRp27, malate dehydrogenase, putative auxin-repressed protein, protein phosphatase (CaTPP1), SAR8.2 protein precursor, late-embryogenesis abundant protein 5 (LEA5), DNAJ protein homologue, xyloglucanendo-1,4-beta-D-gucanase precursor, PR10, and the putative non-specific lipid transfer protein StnsLTP.


Assuntos
Sequência de Aminoácidos , Northern Blotting/métodos , Capsicum/genética , Temperatura Baixa , Sequência Consenso , Proteínas de Ligação a DNA/química , Desidratação/genética , Regulação para Baixo , Congelamento , Expressão Gênica/genética , Perfilação da Expressão Gênica , Regulação da Expressão Gênica de Plantas/genética , Proteínas de Homeodomínio/química , Dados de Sequência Molecular , Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos/métodos , Filogenia , Proteínas de Plantas/química , Homologia de Sequência do Ácido Nucleico , Cloreto de Sódio , Fatores de Transcrição/química , Regulação para Cima
5.
São Paulo; s.n; 2005. [76] p. ilus, tab, graf.
Tese em Português | LILACS | ID: lil-403661

RESUMO

A expressão de Smads e de membros da família AP1/ jun-fos podem refletir alterações da via de TGF, uma via importante para o câncer epidermóide de cabeça e pescoço (HNSCC). Encontramos expressão aumentada dos mRNAs das Smads1-8 em HNSCC em comparação com tecido normal adjacente, por RPA. Além disso, as curvas de sobrevida de Kaplan Meier e a análise multivariada mostraram que a Smad6+ parece ser um fator determinante de bom prognóstico em HNSCC. Quanto a família AP-1, mensurado por Northern blot, somente Fra-1 mostrou-se aumentado no tumor e associado à presença de linfonodos comprometidos. Nossos dados sugerem que a positividade de Smad6 possa ser marcador de bom prognóstico em HNSCC / Smad and AP1 messenger RNA expression may underlie disruptions affecting TGF signaling in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Analysis of Smads1-8 mRNA expression by RPA has shown Smad expression is globally increased in tumor as compared to adjacent normal tissue. Kaplan Meier survival curves and multivariate analysis revealed that Smad6 positivity in tumor was an independent good prognostic factor in HNSCC. In relation to AP-1, as measured by Northern blot, only Fra-1 was overexpressed in tumor and directly related to the presence of lymph node involvement. Our data suggest that Smad6 may be a marker of good prognosis in HNSCC...


Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Carcinoma de Células Escamosas/fisiopatologia , Neoplasias de Cabeça e Pescoço/fisiopatologia , RNA Mensageiro , Fator de Transcrição AP-1 , Ensaios de Proteção de Nucleases/métodos , Northern Blotting/métodos , Fatores de Transcrição , Fator de Crescimento Transformador beta
6.
Journal of Korean Medical Science ; : 309-314, 2000.
Artigo em Inglês | WPRIM | ID: wpr-132618

RESUMO

To evaluate possible roles of matrix metalloproteinase (MMP)-1, -2, tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1, -2 and membrane-type-1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) in invasion of human gliomas, expressions of these proteins were investigated in ten cases of human glioma and two meningioma tissues and eight human glioma cell lines. In gelatin zymography, MMP-2 activities of glioblastomas were higher than astrocytomas. The activated form of MMP-2 was seen in five of six cases of glioblastomas, but not in astrocytomas. MMP-9 activity was detected in all cases of malignant astrocytomas but the reactivity of MMP-9 was weaker than that of MMP-2. MT1-MMP mRNA expression in glioblastomas was higher than that in astrocytomas. Five cases of glioblastomas with activated form of MMP-2 had MT1-MMP expressions. In vitro, human glioma cell lines with high expression of MT1-MMP also showed high MMP-2 activity. TIMP-1 transcripts were constitutively present in almost all glioma tissues and cell lines, whereas TIMP-2 mRNA were weak especially in malignant gliomas. Imbalance of TIMP-2/MMP-2 was observed using immunoprecipitation analysis in a glioma cell line. High expression of MMP-2 and MT1-MMP is possibly involved in invasiveness of malignant glioma.


Assuntos
Humanos , Animais , Northern Blotting/métodos , Encéfalo/patologia , Neoplasias Encefálicas/patologia , Neoplasias Encefálicas/enzimologia , Ativação Enzimática , Metaloproteinase 2 da Matriz/metabolismo , Metaloproteinase 2 da Matriz/genética , Metaloproteinase 9 da Matriz/metabolismo , Regulação Enzimológica da Expressão Gênica , Glioma/patologia , Glioma/enzimologia , Metaloendopeptidases/genética , Papio , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-2/genética , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-1/genética , Células Tumorais Cultivadas
7.
Journal of Korean Medical Science ; : 309-314, 2000.
Artigo em Inglês | WPRIM | ID: wpr-132614

RESUMO

To evaluate possible roles of matrix metalloproteinase (MMP)-1, -2, tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1, -2 and membrane-type-1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) in invasion of human gliomas, expressions of these proteins were investigated in ten cases of human glioma and two meningioma tissues and eight human glioma cell lines. In gelatin zymography, MMP-2 activities of glioblastomas were higher than astrocytomas. The activated form of MMP-2 was seen in five of six cases of glioblastomas, but not in astrocytomas. MMP-9 activity was detected in all cases of malignant astrocytomas but the reactivity of MMP-9 was weaker than that of MMP-2. MT1-MMP mRNA expression in glioblastomas was higher than that in astrocytomas. Five cases of glioblastomas with activated form of MMP-2 had MT1-MMP expressions. In vitro, human glioma cell lines with high expression of MT1-MMP also showed high MMP-2 activity. TIMP-1 transcripts were constitutively present in almost all glioma tissues and cell lines, whereas TIMP-2 mRNA were weak especially in malignant gliomas. Imbalance of TIMP-2/MMP-2 was observed using immunoprecipitation analysis in a glioma cell line. High expression of MMP-2 and MT1-MMP is possibly involved in invasiveness of malignant glioma.


Assuntos
Humanos , Animais , Northern Blotting/métodos , Encéfalo/patologia , Neoplasias Encefálicas/patologia , Neoplasias Encefálicas/enzimologia , Ativação Enzimática , Metaloproteinase 2 da Matriz/metabolismo , Metaloproteinase 2 da Matriz/genética , Metaloproteinase 9 da Matriz/metabolismo , Regulação Enzimológica da Expressão Gênica , Glioma/patologia , Glioma/enzimologia , Metaloendopeptidases/genética , Papio , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-2/genética , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-1/genética , Células Tumorais Cultivadas
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